RP—HPLC法测定复方甘草酸单铵注射液中甘草酸单

　复方甘草酸单铵注射液为甘草酸单铵、盐酸半胱氨酸、甘氨酸的灭菌水溶液，适用于急、慢性肝炎引起的肝功能异常；对中毒性肝炎有一定的辅助治疗作用；亦可用于食物中毒、药物中毒、药物过敏等，其现行标准为国家药品监督管理局国家药品标准WS-10001-（HD-0347）-2002，采用紫外分光光度法（吸收系数法）测定甘草酸单铵的含量，专属性不强，本文建立了反相高效液相色谱法测定复方甘草酸单铵注射液中甘草酸单铵的含量，方法专属性强，重现性好，结果准确，可用于复方甘草酸单铵注射液中甘草酸单铵的含量测定。
　　1 仪器与试剂
　　Waters e2695-2489型高效液相色谱仪；甘草酸单铵对照品（中国食品药品检定研究院，批号：Y0000433；复方甘草酸单铵注射液（江苏正大天晴药业股份有限公司，批号：20140217、20140321、20131203）；乙腈：色谱纯；磷酸：分析纯。
　　2 方法与结果  
　　2.1 系统适用性
　　色谱柱：Waters C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流动相：乙腈-水（35∶65），用H3PO4调pH值为3.0；柱温：25 ℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：252 nm；进样体积：20 μl。在此色谱条件下，理论塔板数以甘草酸单铵峰计：4500；拖尾因子：1.01；甘草酸单铵与相邻杂质峰的分离度均符合要求。
　　2.2 制备溶液
　　精称甘草酸单铵对照品40.12 mg，加水溶解并稀释至50 ml，摇匀，作为对照品储备液；精取对照品储备液5 ml，加水稀释至50 ml，摇匀，作为对照品溶液；取供试品，制备40 μg/ml供试品溶液。
　　2.3 专属性
　　取复方甘草酸单铵注射液适量（约相当于甘草酸单铵4 mg），分别经1.0 mol/L盐酸、1.0 mol/L氢氧化钠、强热（160 ℃，1 h）、氧化（30%过氧化氢）得各破坏产物，制备溶液，进样，由色谱图得知甘草酸单铵与各降解产物分离良好，专属性强（图1）。
　　时间（min）
　　A
　时间（min）
　　B
　　时间（min）
　　C
　　时间（min）
　　D
　　图1 专属性色谱图
　　A.酸破坏；B.碱破坏；C.热破坏；D.氧化破坏
　　2.4 标准曲线制备
　　精取对照品储备液1、2、5、10、20 ml，分别加水稀释至置50 ml，摇匀，进样。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，作回归曲线：Y=13423.19X-7067.18，r=0.9999（n=5），表明甘草酸单铵在0.16048～3.2096 μg范围内与峰面积有良好线性关系。
　　2.5 精密度
　　精取对照品溶液20 μl进样，测定峰面积，重复进样5次，计算峰面积的RSD=0.76%，说明仪器精密度符合要求。
　　2.6 稳定性
　　取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h测定峰面积，RSD=0.65%（n=5），说明供试品溶液在12 h内稳定。
　　2.7 重现性
　　取同一样品（批号：20140217），制备供试品溶液5份，测定含量，平均值=98.0%，RSD=0.78%，说明重现性符合要求。
　　2.8 加样回收率
　　精取样品（批号：20140217，含量98.9%）适量各9份，每三份一组，每组精密加入对照品贮备液3、5、7 ml，制备低、中、高（80%、100%、120%）3个浓度的溶液，测定加样回收率，结果见表1。
　　表1 加样回收率测定结果（n=9）
　　2.9 样品含量测定
　　取对照品溶液及供试品溶液，依法测定，按外标法计算，测定结果见表2。
　　表2 样品测定结果
　　3 讨论
　　检测波长的选择：以流动相为溶剂，用岛津UV-2550紫外分光光度计测定，甘草酸单铵在252 nm波长处有最大吸收，故选定在此波长处测定含量，方法灵敏。
　　流动相的确定：本法流动相是乙腈-水（35∶65），用H3PO4调pH值为3.0，不含缓冲盐，对色谱系统的损害程度较小，且峰型对称（拖尾因子为1.01）。流动相的选择符合《中国药典》2010年版二部附录新增要求尽可能少用含有缓冲液流动相的原则。
　　本法具有较宽的线性范围和较高的回收率，结果简便、可靠准确。
　　通过专属性实验可以得出，甘草酸单铵主峰能与各种条件破坏后的降解产物峰良好分离，专属性强，可以作为复方甘草酸单铵注射液含量测定的方法。
　　
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