注射用清开灵冻抗菌活性研究

【摘要】 目的：研究注射用清开灵冻干粉对临床分离致病菌的体外抗菌活性。方法：注射用清开灵冻干粉与市售清开灵注射液作比较，采用二倍稀释法，测定注射用清开灵冻干粉浓缩液对临床分离的47株致病菌的最低抑菌浓度（mic）及最低杀菌浓度（mbc），观察注射用清开灵冻干粉体外抗菌活性。结果：对金葡菌、大肠埃希菌、铜绿假单孢菌、肺炎克雷伯菌，注射用清开灵冻干粉与市售清开灵注射液均显示出良好的体外抗菌活性，注射用清开灵冻干粉体外抗菌活性强于市售清开灵注射液。按药液稀释度计算，注射用清开灵冻干粉浓缩液对金葡菌、大肠埃希菌、铜绿假单孢菌、肺炎克雷伯菌的mic和 mbc分别为市售清开灵注射液的1/4～1/2。结论：注射用清开灵冻干粉对临床分离的致病菌，具有较好的抗菌活性，且略优于市售清开灵注射液。

【关键词】 注射用清开灵冻干粉；最低抑菌浓度；最低杀菌浓度

清开灵由金银花、黄芩、栀子、板蓝根、珍珠母、水牛角、胆酸等中药组成，具清热解毒、醒神开窍之功效。其有效成分金银花、板蓝根、黄芩、栀子均具有抗病原微生物作用，尤其对临床常见致病菌具有抑制和杀灭作用[1-3]。近年来对清开灵抗菌的报道以临床观察为主[4,5]，却鲜有实验室研究报道。清开灵冻干粉属药物新剂型，拟用于静脉滴注，本试验特采用二倍稀释法，测定其体外抗菌活性，为临床用药提供实验依据。

1实验材料

1.1药物与试剂注射用清开灵冻干粉，试验用药为冻干前浓缩液，生药计377.00mg·ml－1，提取物计84.20mg·ml－1，广州欧华医药生物技术有限公司提供。市售清开灵注射液，10ml/支，生药含量以75mg·ml－1计，其中含黄芩苷50mg、总氮25mg，神威药业有限公司生产。头孢曲松，批号0601026，海南三洋药业有限公司赠送。

1.2试验菌株及培养基金葡球菌10株，表皮葡萄球菌5株，肺炎链球菌5株，肠球菌属7株（肠球菌2株，粪肠球菌5株），大肠埃希菌5株，铜绿假单孢菌5株，肺炎克雷伯菌5株，沙门氏菌5株，共计47株。均为2005～2006年于北京、成都等地区收集的临床分离致病菌，经api方法及常规方法重新鉴定后使用。质控菌株为铜绿假单孢菌atcc27853，金葡球菌atcc25923、大肠埃希菌atcc25922，各1株，由四川抗菌素工业研究所提供。mh培养基，中国药品生物制品检定所产品。

2方法

2.1最低抑菌浓度（mic）的测定

采用琼脂二倍稀释法[6]测定注射用清开灵冻干粉、市售清开灵液对受试菌株的最低抑菌浓度（mic）。分别取注射用清开灵冻干粉浓缩液、市售清开灵注射液原液20ml，加至40ml融化的琼脂培养基（融化至50℃），混匀，从中吸出20ml至灭菌平皿内，余下的20ml琼脂中再添加入20ml无药琼脂混匀，再从中吸出20ml至下一个平皿内。以此类推，两倍稀释制备含药终浓度为原液浓度1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048（注射用清开灵冻干粉浓缩液相当于生药浓度188.50、94.25、47.13、23.56、11.78、5.89、2.95、1.47、0.74、0.37、0.18mg·ml－1）的系列平皿，冷却后再分别用多点接种仪（denley a400）于各平皿表面接种细菌，菌液终浓度为105cfu·ml－1。置于37℃中培养24小时，观察结果，以无细菌生长平皿内药物的最低浓度为该菌的最低抑菌浓度（mic）。以头孢曲松为阳性对照药，其终浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg·ml－1。

2.2最低杀菌浓度（mbc）的测定

选取2株金葡菌、2株表葡菌、2株大肠埃希菌、2株铜绿假单孢菌和2株肺炎克雷伯菌作为受试菌，先用液体二倍稀释法[6]测定出注射用清开灵冻干粉浓缩液、市售清开灵注射液对试验菌的mic值，再将未见细菌生长管的培养液转种于无药琼脂表面，37℃继续培养18小时，仍无细菌生长的药物最低浓度为最低杀菌浓度（mbc）。

3结果

3.1mic测定结果

注射用清开灵冻干粉浓缩液、市售清开灵注射液对所试临床分离致病菌的最低抑菌浓度（mic）见表1。

由表中可知，注射用清开灵冻干粉浓缩液对所试金葡菌、表葡菌、肺炎链球菌及肠球菌属，均具有较好的抗菌作用，mic值范围在1/1024～1/4原液浓度（相当于生药含量0.37～94.25mg·ml－1）。对所试大肠埃希菌、铜绿假单孢菌、肺炎克雷伯菌、沙门氏菌也具有一定抗菌活性，mic值范围为1/512～1/2原液浓度（相当于生药含量0.74～188.50mg·ml－1）。

市售清开灵注射液对金葡菌、表葡菌、肺炎链球菌及肠球菌的mic值范围在1/256～1/2原液浓度。对金葡菌、大肠埃希菌、铜绿假单孢菌、肺炎克雷伯菌，按药液稀释度计算，则注射用清开灵冻干粉浓缩液体外抗菌活性强于市售清开灵注射液，其mic50、mic90为市售清开灵注射液的1/4～1/2。表1 注射用清开灵冻干粉、市售清开灵注射液最低抑菌浓度（mic） 注射用清开灵冻干粉浓缩液、市售清开灵注射液对所试临床分离致病菌的最低杀菌浓度（mbc）见表2。表2 注射用清开灵冻干粉浓缩液、市售清开灵注射液由表中可知，注射用清开灵冻干粉浓缩液、市售清开灵注射液对所试金葡菌、表葡菌、大肠埃希菌及铜绿假单孢菌，均主要呈现为抑菌作用。注射用清开灵冻干粉浓缩液的mbc为1/64～1/2原液浓度（相当于生药含量5.89～188.50mg·ml－1），是mic的4-8倍以上。对金葡菌、铜绿假单孢菌，按药液稀释度计算，则注射用清开灵冻干粉浓缩液体外抗菌活性强于市售清开灵注射液，其mbc为市售清开灵注射液的1/4～1/2。

4讨论

本文研究结果表明，注射用清开灵冻干粉浓缩液与市售清开灵注射液对金葡菌、表葡菌、大肠埃希菌、铜绿假单孢菌和肺炎克雷伯菌等常见临床致病菌均显示出良好的体外抗菌活性。研究结果还表明，按药液稀释度计算，注射用清开灵冻干粉浓缩液体外抗菌活性强于市售清开灵注射液。

清开灵作为全国中医医院常备抗感染药，其抗菌效果已有较多临床报道[4,5]。其组方源于安宫牛黄丸，由板蓝根、金银花、黄芩、桅子、水牛角、珍珠母、胆酸等中药组成，具清热解毒、化痰通络、醒神开窍之功效。其中，金银花味甘，性寒，能清热解毒，凉散风热；板蓝根味苦，性寒，能清热解毒，凉血利咽；黄芩味苦，性寒，能清热燥湿，泻火解毒[7]。现代药理学研究显示[1,2,3,8]，金银花、板蓝根及黄芩对多种致病性细菌均有不同程度的抑制作用，如金葡菌、表葡菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、甲型链球菌和肺炎双球菌等。具有抗菌活性的化学成分可能包括绿原酸和黄酮类化合物，以及色胺酮和一些化学结构尚未阐明的吲哚类衍生物。这些证据说明金银花、板蓝根和黄芩所含抗菌成分可能是清开灵发挥抗菌作用的主要有效成分，注射用清开灵冻干粉体外抗菌活性可能与这几位中药有关。

细菌感染人体之后，其主要致病物质内毒素作为致热原[9]，可引起患者体温升高，从而产生一系列临床症状。笔者在先前的实验研究中发现[10]，注射用清开灵冻干粉能有效抑制内毒素导致的大鼠发热，显著降低发热大鼠下丘脑ilβ及camp等发热介质的含量，从发热的体内过程上探讨了清开灵对抗感染性发热的一部分作用机制。本文的研究结果表明，清开灵可在体外直接抑制临床致病菌，显示出良好的抗菌活性。这就说明，注射用清开灵冻干粉还可能直接通过抑制致病菌，达到抗感染性发热的效果。对此，需进一步研究证实。

注射用清开灵冻干粉是药物新剂型，便于运输和储存，在生产和流通中显示了独到的优势。本文对其体外抗菌活性进行了评价，证明这种剂型具有良好的抑菌作用，为注射用清开灵冻干粉的临床应用提供了试验依据。注射用清开灵冻干粉对细菌有较强的抑制作用，具有良好的退热效果，并有效减少了抗生素带来的耐药问题，值得临床推广使用

【参考文献】
1 武雪芬，白雁.金银花叶药用成分的提取及抑菌试验研究[j].中成药，2001，23(6)：448449.

2 肖珊珊，金郁，孙毓庆.板蓝根化学成分、药理及质量控制研究进展[j].沈阳药科大学学报，2003，20(6)：455459.

3 赵铁华，邓淑华，杨鹤松.黄岑茎叶活性部位抗菌作用的研究[j].中国药理学通报，2007，23(7)：882886.

4 陈雯，李京鹤.注射用清开灵(冻干粉针)治疗急性上呼吸道感染98例疗效观察[j].时珍国医国药，2007，18(5)：1208.

5 李淑云，洪渌.清开灵注射液治疗老年细菌性肺炎30例临床观察[j].中医药临床杂志，2004，16(4)：309310.

6 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[m].第2版.北京：人民卫生出版社，1991：13401350.

7 王本祥. 现代中药药理学[m]. 第1版.天津：天津科学技术出版社，1997：204，219，299.

8 何显忠，兰荣德.金银花的药理作用与临床应用[j].时珍国医国药，2004，15(12)：865867.

9 blatteis cm. fever:how may circulating pyrogens signal the brain? [j]. news physiol sci,1997,12(2):134.

10李东，杨芳炬等.注射用清开灵冻干粉解热镇痛作用及解热机制的试验研究[j].中药材，2005，28(9)：796799.