临床白假丝酵母感染状况分析及药物敏感性

临床白假丝酵母感染状况分析及药物敏感性

【关键词】 微量稀释法;白假丝酵母;最小抑菌浓度

【摘要】 目的 探讨医院内白假丝酵母感染现状及对常用抗真菌药物的敏感性，为临床真菌感染的治疗提供一定的理论依据。方法 收集临床真菌感染患者标本，进行菌株的分离、鉴定。分析白假丝酵母标本的来源和科室分布情况，并采用clsi颁布的微量稀释法进行药物敏感性实验。结果 白假丝酵母所占比例高达72.2%，主要来源于呼吸内科(65.6%)，以痰标本的真菌分离率最高(86.8%)。药物敏感性实验结果表明，白假丝酵母对两性霉素b(amb)、氟康唑(fcz)、5氟胞嘧啶(5fc)、伊曲康唑(icz)的敏感率依次为100.0%、92.7%、91.4%、64.2%;仅对icz表现为耐药，耐药率为1.4%，但药物依赖性敏感高达34.4%。结论 临床医生应高度重视医院内真菌感染;根据药物敏感性实验结果，合理用药，既能提高疗效，又可预防耐药性的产生。

【关键词】 微量稀释法;白假丝酵母;最小抑菌浓度

　【abstract】 objective to analyze the current conditions of nosocomial infection on candida albicans and the susceptibility to common antifungal drugs, in order to provide a theoretical basis for the treatment of fungal infection. methods the specimens of clinical infection of fungi were collected and the isolates were identified. then the cases of candida albicans were analyzed according to the source of samples and division distribution. microdilution susceptibility testing was promulgated by clsi. results the infection rate of candida albicans was as high as 72.2%. the infection rate of respiratory system was the most high (65.6%). the highest positive rate of sputum specimens was 86.8%. the results of susceptibility testing presented the sensitive rates of candida albicans to amb, fcz, 5fc, icz were followed by 100%,92.7%,91.4%,64.2%; icz showed only resistance and the resistant rate to icz was 1.4%, but the sensitive rate of drug dependence was up to 34.4%. conclusions the clinicians should think highly of the nosocomial fungal infections and use antifungal drugs on the rules of rational application. this will help to improve the curative effect and prevent drug resistance.

　　【key words】 microdilution susceptibility testing; candida albicans; mic

　　近年来，由于各种原因导致免疫力低下人群日益增加，医院内真菌感染的发生率不断增高。假丝酵母感染为第一位，其中，白假丝酵母所占的比例最高，但不同地域检出的各菌种构成比有很大差异〔1，2〕。而且，临床感染真菌对几种主要唑类抗真菌药物的耐药菌株日益增多，4年间的耐药率上升了9.6%～16.8%〔3〕，因而给临床真菌感染的治疗带来了困难。本研究分离并鉴定了来自临床的白假丝酵母，进行一般状况分析，同时采用美国临床实验室标准化协会(clsi)颁布的微量稀释法(m27a方案)进行药物敏感性实验，为临床抗真菌药物选择提供一定的理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 收集标本

　　2008年7月至2009年6月，共收集吉林省两所医院的临床真菌感染患者标本209例。患者的平均年龄为69岁，60岁及以上者175例(83.7%)，60岁以下者34例(16.3%)。

　　1.2 菌株的分离、鉴定

　　将临床标本接种于马铃薯葡萄糖琼脂 (pda)平板培养基分离培养，如疑似酵母样菌，37℃培养1～3 d，观察菌落特点、涂片镜检。并使用科玛嘉显色培养基进行鉴定。

　　1.3 菌悬液制备

　　用0.9% 无菌生理盐水制备浓度为(1～3)×106 cfu/ml的菌悬液，实验时用rpmi1640培养液稀释至浓度为(1～3)×103 cfu/ml。

　　1.4 抗真菌药物的配制

　　将icz、amb用二甲基亚砜配制成1.6×103μg/ml的贮存液;将fcz、5fc用蒸馏水配制成浓度为3.2×103μg/ml的贮存液;置-20℃保存、备用。实验时用rpmi1640培养液将icz和amb 配制成160 μg/ml的工作液，将fcz和5fc配制成640 μg/ml的工作液。

　　1.5 药物敏感性实验

　　采用clsi(m27a方案)进行药物敏感性实验。药物采用倍比稀释法，fcz、5fc的终浓度为64～0.125 μg/ml，icz、amb终浓度为16～0.03 μg/ml。菌悬液终浓度为(0.5～1.5)×103 cfu/ml。同时，以近平滑假丝酵母(atcc22019)和克柔假丝酵母(atcc6258)作为质控菌株，并设立生长对照和阴性对照。

　　1.6 最小抑菌浓度(mic)的判定

　　接种后的96孔板37℃培养24 h后，观察结果。fcz、icz、5fc取50%受抑制、amb以100%抑制为mic判定终点。药物敏感性的判定标准见表1。表1 抗真菌药物的敏感性判定标准 1)s代表敏感;2)sdd代表剂量依赖性敏感;3)r代表耐药;表3同

　　2 结 果

　　2.1 临床真菌感染标本

　　共收集临床假丝酵母感染标本209例，其中，白假丝酵母151例，占72.2%。白假丝酵母标本的来源主要为痰(86.8%)，其次为咽拭子(7.2%)、尿液(3.6%)、粪便(1.2 %)及血液(1.2 %)。标本几乎遍布临床各科室，但主要分布在呼吸内科(65.6%)。见表2。表2 151例临床白假丝酵母感染标本的科室分布

　　2.2 抗真菌药物的mic值

　　本实验中，fcz对白假丝酵母的mic值范围为0.12～32 μg/ml，约60%菌株的mic值介于0.12～1 μg/ml;5fc的mic值范围为0.12～16 μg/ml，近80%菌株的mic值介于0.12～0.5 μg/ml;icz的mic值范围为0.03～1 μg/ml，约65%菌株的mic值介于0.03～0.12 μg/ml;amb的mic值范围为0.06～1 μg/ml，约70%菌株的mic值介于0.25～1 μg/ml。见图1。图1 4种抗真菌药物对白假丝酵母的mic值分布

　　2.3 白假丝酵母对抗真菌药物的敏感性

　　由151例白假丝酵母对4种抗真菌药物的mic值可知，绝大多数菌株的mic值在clsi (m27a)方案规定的敏感范围。 其中，对amb敏感率为100.0%;剂量依赖性敏感菌株所占比例最高的为icz (34.4%)，其次为5fc (8.6%)、fcz (7.3%);对icz的耐药率为1.4%。见表3。表3 151例白假丝酵母对4种抗真菌药物的敏感性分布

　　3 讨 论

　　目前，临床真菌感染的发病率日益增高，居于第一位的仍然是白假丝酵母。本文收集的假丝酵母感染患者标本中，60岁及以上者所占比例高达83.7%;白假丝酵母占72.2%，标本几乎遍布临床各科室，但主要分布在呼吸内科。其原因可能是老年肺部疾病患者，呼吸道防御屏障受损，局部黏膜免疫功能低下，易引起条件致病性真菌的定植和感染，这应引起临床医生的高度重视。

　　近年来，一些新的广谱、高效、低毒的抗真菌药物逐渐应用于临床，但价格昂贵。临床应用较多的仍是传统的抗真菌药物，种类有限，毒副作用较大，且耐药菌株日益增多，因此应根据药物敏感性实验结果，合理使用抗真菌药物。笔者选用了操作简便、试剂用量少、结果可肉眼观察的微量稀释法，对临床白假丝酵母进行药物敏感性分析。

　　fcz和icz的抗菌谱广、毒性低，较多地用于临床真菌感染的治疗和预防。文献表明，对唑类药物的耐药率非白色假丝酵母明显高于白假丝酵母，且主要表现为热带假丝酵母和克柔假丝酵母对这两种药物的耐药呈上升趋势〔4〕。本研究结果表明，白假丝酵母对fcz的敏感率为92.7%，说明具有良好的体外抗菌活性;对icz的耐药率为1.4 %，虽低于文献报道的白假丝酵母对icz的耐药率(7.5%)〔5〕，但值得注意的是剂量依赖性敏感菌株高达34.4%，如不能合理用药，白假丝酵母对icz的耐药率将会逐步升高。

　　两性霉素b抗菌谱广、肾毒性大，5fc抗菌谱窄，所以这两种药物的临床应用有一定的局限性，各医院的使用情况不同。本研究表明，amb对白假丝酵母的敏感率高达100.0%，约70%菌株的mic值介于0.25～1 μg/ml，和文献报道的结果差异较大〔6〕，但约70%菌株的mic值处于较高的药物浓度组。另外，本研究没有检测到对5fc的耐药菌株，但剂量依赖性敏感率为8.6%。这说明，白假丝酵母对amb、5fc的敏感性较高。

　　综上分析，临床医生应高度重视各科室的真菌感染情况，特别是感染率较高的呼吸内科及老年患者。而且，应根据药物敏感性实验结果，综合考虑药物特性、感染真菌种类、患者的身体情况及经济状况等多种因素，合理用药，既提高疗效、又可防止耐药性的产生。

【参考文献】
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　　3 周建党,黄 辉,陈 颖,等.四年间酵母样真菌感染的病原菌分布与耐药特征分析〔j〕.中国微生态学杂志,2007;19(2):2023.

　　4 张 芳,李玉敏,崔惠景,等.医院常见酵母样真菌的耐药特点分析〔j〕.检验医学与临床，2008;5(11): 64950.

　　5 郝秀红,马 骢.128株白色念珠菌感染菌种的分布及耐药分析〔j〕.海军总医院学报，2008;21(2): 810.

　　6 王文莉,郑玮清,李若瑜,等.采用ncclsm27a方案微量法检测念珠菌对抗真菌药物的敏感性〔j〕.2001;24 (20): 1078.

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