自然杀伤T细胞在髋关节骨关节炎的表达与临床意义

苏晓恩 孔志强 邓海棠 黄朝荣 张震乾 陈伟豪

肇庆市第一人民医院骨科，广东肇庆 526020

[摘要] 目的 探讨自然杀伤T细胞(NKT)在髋关节骨关节炎(HO)患者的表达与临床意义。 方法 收集45例HO患者外周血，采用流式细胞术检测其内NKT及其胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)及白介素4(IL-4)的含量。并与45例类风湿性关节炎(RA)患者进行对比。结果 与健康对照组比较，RA及HO组患者NKT及IFN-γ均显著降低差异有统计学意义(P<0.05)；在IL-4的比较方面，RA组显著低于对照组，但HO组IL-4与对照组比较，差异无统计学意义(P=0.098)。治疗后RA及HO组NKT、IFN-γ及IL-4均较治疗前不同程度上升，均以HO回升幅度明显，差异有统计学意义(P<0.05)，但治疗后RA组IFN-γ频率较前无统计学变化，而HO组较治疗前明显上升，且HO组IFN-γ频率明显高于RA组(P=0.006)。结论 NKT在HO免疫机制当中起到重要作用，其细胞因子IL-10在HO与RA的鉴别起到重要作用，且IFN-γ与疗效密切相关。

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关键词 骨关节炎；自然杀伤T细胞；细胞因子；γ干扰素

[中图分类号] R684.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-074２（２０１4）06（b）－０025-03

目前国外研究发现免疫异常是骨关节炎(Osteoarthritis, OA)病情进展的重要机制[1]。国内外研究已发现具有自然杀伤细胞(NK)和T细胞(TC)双重活性的自然杀伤T细胞(NKT)在类风湿性关节炎(RA)患者表达减少，是RA病情加重的重要免疫因素[2]。为探讨自然杀伤T细胞(NKT)在髋关节骨关节炎(HO)患者的表达与临床意义，该研究选取2011年1月—2013年6月该院骨科就诊的45例HO患者为研究对象，推测NKT可能在OA的发病机制起到重要作用。该研究通过流式细胞术观察髋关节骨关节炎(HO) 患者外周血NKT及其胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)及白介素4(IL-4)的含量，发现其呈一定的特征性变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院骨科就诊的45例HO患者股骨头作为观察组，同时排除类风湿性关节炎、痛风等其他疾病[3]。另外选取同期就诊的RA患者45例作为对照组。其中HO组男性31例，女性14例，年龄(55.3±10.8)岁；RA组男33例，女12例，年龄(53.7±11.9)岁；并选取同期到院体检的健康志愿者40名作为参考，男20例，女10例，年龄(51.6±10.7)岁。

1.2 标本采集与治疗

清晨空腹抽取以上3组的静脉血约5 mL。采用NSAID类抗炎药对HO及RA组患者进行治疗，4周后再次采集外周血[4]。以上标本均抗凝保存于4℃冰箱内待测。

1.3 流式细胞术

CD3、CD16、CD56、IFN-γ及IL-4细胞因子抗体均购自南京建成生物工程研究所。多色流式细胞术为Beckman产品。将以上3组外周血抗凝标本采用流式细胞仪检测NKT、IFN-γ及IL-4的频率[5]。

1.4 统计方法

计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，采用两独立样本t检验比较两组间的差异，运用配对t检验比较治疗前后的指标变化，计数资料采用χ2分析LSD法进行3组间的两两比较，使用统计软件包spss 13.0分析数据。

2 结果

2.1 3组的NKT及其细胞因子比较

与健康组比较，RA及HO组患者NKT及IFN-γ均显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)。在IL-4的比较方面，RA组显著低于对照组，但HO组IL-4与对照组差异无统计学意义(P-0.098)，见表1、图1。

说明：左上象限代表NKT，红色小点越致密代表NKT的频率越高，反之代表密度越低。

2.2 治疗前后NKT及其细胞因子的变化情况

治疗后RA及HO组NKT、IFN-γ及IL-4均较治疗前不同程度上升，均以HO回升幅度明显，差异有统计学意义(P<0.05)，但治疗后RA组IFN-γ频率较前无统计学变化，而HO组较治疗前明显上升，且HO组IFN-γ频率明显高于RA组(P=0.006)，见表2。

3 讨论

骨关节炎(Osteoarthritis，OA)是一种临床常见慢性关节疾病，其发病率随着着社会的老龄化而增高。来自Yoshiga等[6]的流行病学调查显示OA在女性患病率中占第四位，在男性患病率中占第八位；其中60~70岁的老年人的OA患病率约为60%，70岁以上的老年人的OA患病率约为70%，其病理改变主要是关节软骨滑膜增生、关节囊挛缩，软骨面破坏、软骨下骨囊性改变、关节边缘骨赘形成、肌萎缩、韧带松弛等及肌肉萎缩无力等。最近Liu等[7]报道OA累及髋关节的发病率越来越高，可能与该关节的骨质疏松病理学基础有关，因此该研究选择髋关节骨关节炎(HO)作为观察对象。

Lfgren等[8]的研究发现，HO的发病机制与免疫因素的异常密不可分，尤其与T细胞更为相关。Jung等[9]发现，由CD4+及CD8+T细胞功能障碍介导的细胞免疫异常在OA的软骨破坏过程起到至关重要作用。因此T细胞的异常是近年OA机制的免疫学研究热点。自然杀伤T细胞(NKT)，是一种免疫调节细胞，同时表达T细胞标志性的CD3分子，又表达NK细胞的CD16及CD56分子，从而具备自然杀伤细胞(NK)和T细胞(TC)双重免疫活性。NKT细胞可在抗原刺激下体外大量扩增，呈TH0样细胞因子分泌，激活后可以产生IFN-γ（属于Th1细胞因子，介导细胞免疫）及IL-4（属于Th2细胞因子，介导体液免疫）等细胞因子，并具有细胞毒性作用[10]。Jacques等[11]报道在类风湿性关节炎(RA)患者表达减少，是RA病情加重的重要免疫因素。综合上述研究背景，推测OA的发病机制与病情进展可能与NKT密切相关。

该研究结果提示：RA及HO组患者NKT及IFN-γ均显著低于健康志愿者；但IL-4的情况有所不同——仅RA组显著低于健康组，但HO组IL-4与对照组无统计学差异，这说明IL-4对于HO与RA的鉴别诊断有价值。从治疗后的变化看，RA及HO组NKT、IFN-γ及IL-4均较治疗前不同程度上升，仍以HO回升幅度明显；但治疗后RA组IFN-γ频率较前无统计学变化，而HO组IFN-γ较治疗前明显上升，且HO组IFN-γ频率明显高于RA组，这与Miellot-Gafsou等[12]的结果相一致。以上说明一个更为重要的现象：IFN-γ对于评价HO的病情进展与预后更有价值，因此具有重要的临床意义。

通过该研究，NKT在HO的发病机制当中起到重要的免疫调节作用，其活性降低是一个重要环节，治疗后NKT及IFN-γ含量的上升从而病情恢复，是HO的重要免疫调节治疗依据。

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参考文献

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[12] Miellot-Gafsou A, Biton J, Bourgeois E, et al. Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment[J].Immunology,2010,130(2):296-306.

（收稿日期：2014-03-16）

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