益心胶囊对急性心肌梗塞大鼠血清高敏C反应蛋白

【摘要】 目的观察益心胶囊对急性心肌梗塞(acute myocardial infarction，ami)大鼠血清高敏c反应蛋白(high sensitivity c-reactive protein,hs-crp)和白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)的影响，明确其在预防心肌梗塞中的作用机理。方法大鼠70只，随机分为正常对照组、ami组、假手术组、消心痛组、益心胶囊大剂量组、益心胶囊小剂量组。大鼠灌胃给药连续21d，末次给药后1h，结扎左冠状动脉前降支，体表心电图示st段弓背抬高或坏死性 q 波为ami模型形成，结扎24h后测定大鼠血清hs-crp和il-6含量。结果与正常对照组比较，ami组血清hs-crp和il-6含量明显升高(p<0.01)。与ami组比较，益心胶囊组血清hs-crp和il-6含量显著降低(p<0.01)，以大剂量组作用显著。消心痛亦可降低ami大鼠血清hs-crp和il-6含量(p<0.01)。结论益心胶囊给药可以降低急性心肌梗塞大鼠血清炎症因子含量，这可能是其预防心肌梗塞的作用机理之一。

【关键词】 益心胶囊; 急性心肌梗塞; 高敏c反应蛋白; 白细胞介素-6

益心胶囊是由麝香、苏合香、丹参、黄芪等多味药物组成，对于心血管疾病有着良好的 治疗 效果。大量的临床实践表明，长期使用益心胶囊可预防冠状动脉疾病的发生，减少致死性和非致死性心血管病事件的发生率，局限心血管病事件的发病范围及严重程度。因此，我们采用结扎大鼠冠状动脉造成急性心肌梗塞模型，研究益心胶囊不同剂量预先给药对急性心肌梗塞的保护作用及其作用机制，为其临床合理用药提供必要的实验依据。

　 　1 材料与仪器

　　1.1 动物健康sd大鼠70只，雌雄各半，体重200～220 g，购自河南省实验动物中心，许可证号:scxk(豫)2005-0011。

　　1.2 药物益心胶囊，0.3 g/粒，麝香、苏合香、丹参、黄芪等12味药物组成，郑州大学药学院药剂教研室提供;消心痛，10 mg/片，珠海丽珠集团，批号20080302;戊巴比妥钠，上海试剂二厂产品，批号20060802;盐酸利多卡因注射液，20 ml/支(0.4 g)，南京第四制药厂产品，批号20080307。

　　1.3 仪器ecj1550p心电图机，日本光电公司产品;dh150型动物呼吸机，浙江大学医疗仪器厂产品;beckman-coolter-cx9全自动生化分析仪，美国beckman公司产品。ec-911放射免疫自动γ计数仪，中佳光电公司产品;cr3i多功能台式离心机，法国joudan公司产品。

　　1.4 试剂hs-crp试剂盒，上海长征医学科技有限公司产品，批号080405;il-6试剂盒，北京北免东雅生物技术研究所产品，批号080306。

　 　2 方法

　　2.1 动物分组及给药sd大鼠70只，雌雄各半，适应性喂养1周，随机分为正常对照组(10只)，其余大鼠依据性别和体重随机分为ami组、阳性对照组、益心胶囊大剂量组、益心胶囊小剂量组、假手术组，每组12只。分组当天，益心胶囊配成药液，分别以(2 g·kg-1·d-1)和(1 g·kg-1·d-1)给大鼠灌胃，阳性药物组以消心痛(10 mg·kg-1·d-1)，1次/d，连续21 d。正常组、模型组和假手术组给予等量的生理盐水灌胃。

　　2.2 急性心肌梗塞模型制备末次给药后1 h，除正常对照组外，其余大鼠行冠脉结扎术[1]。腹腔注射3%戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉大鼠，静脉注射1mg/kg利多卡因预防室颤，将大鼠仰位固定于手术台上，除毛。消毒，沿胸骨中线自胸锁关节至剑突上切开皮肤，连接呼吸机(频率48 次/min)，暴露胸骨及软骨部位，用手术刀在剑突下端上方1 cm处正中位劈开胸骨，沿胸骨正中向上用剪刀延长切口约3 cm，用小开胸器轻轻撑开胸腔切口，可见心包及搏动之心脏。用眼科剪将心包前部剪开，用止血钳将左心耳轻轻提起，用持针器持小圆变针在冠状动脉前降支根部穿一线，5o号线结扎之，于结扎后大鼠四肢皮下连接心电图机(纸速25 mm/s,电压10 mm/mv)，以体表ecg 出现 st 段弓背向上抬高或呈坏死性 q 波，直视下可见被结扎血管供血区心肌变为暗紫色，并持续 30 min为模型成功标志，逐层关闭缝合胸腔。假手术组仅在左冠状动脉前降支穿线不结扎。术后24 h，各组动物均有死亡。具体动物数见表1。

　　2.3 检测指标及方法冠脉结扎后24 h，股静脉采血，冷冻离心10 min(3 000 r/min)，分离血清，置于-20℃冰箱内保存待测。胶乳增强免疫比浊法测定血清hs-crp，测定范围0.1～10 mg/l;放射免疫法测定血清il-6，测定范围6.25～250 pg/l。表1 益心胶囊对急性心肌梗塞大鼠hs-crp含量的影响与ami组比较，*p<0.05，**p<0.01; 与正常对照组比较， δp<0.05，δδp<0.01

　　2.4 统计学处理采用统计软件spss12.0进行统计学处理，所有数据±s表示，多组间比较用单因素方差分析，p<0.05为差异有显著性意义。

　 　3 结果

　　3.1 益心胶囊对急性心肌梗塞大鼠血清hs-crp含量的影响由表1可见，结扎冠状动脉后，与正常对照组比较，ami组血清hs-crp含量显著增高(p<0.01)。而预先给药21 d的大鼠，与ami组比较，存活率均增加，益心胶囊组血清hs-crp含量显著降低(p<0.01)，以大剂量组作用显著。阳性对照药消心痛亦可降低血清hs-crp含量(p<0.01)。

　　3.2 益心胶囊对急性心肌梗塞大鼠血清il-6含量的影响由表2可见，结扎冠状动脉后，与正常对照组比较，ami组血清il-6含量显著增高(p<0.01)。而预先给药21 d大鼠，与ami组比较，存活率增加，益心胶囊组血清il-6含量显著降低(p<0.01)，以大剂量组作用显著。阳性对照药消心痛亦可降低血清il-6含量(p<0.01)。表2 益心胶囊对急性心肌梗塞大鼠il-6含量的影响与ami组比较，*p<0.05，**p<0.01; 与正常对照组比较， δp<0.05，δδp<0.01

　 　4 讨论

　　急性心肌梗塞是冠心病的危急重症，属于中医“真心痛”“心痹”等范畴，为本虚标实之患，本虚以气虚和阳虚为主，标实以血淤、浊阻为要。益心胶囊为 治疗 心血管疾病的有效药物，由麝香、苏合香、丹参等药物组成。麝香开窍通络止痛为君;苏合香芳香开窍;丹参活血化瘀为臣;黄芪益气养阴为佐。全方配伍，共奏芳香开窍、通经止痛之效。

　　随着 现代 研究的深入，炎症在急性心肌梗塞的发生、 发展 和预后过程中的作用越来越重要[2]。hs-crp作为炎症过程中最具有标志性的因子，已被证实是急性心肌梗塞发生发展中具有重要预后意义的指标，通常它在心肌梗塞后6h开始升高，24～48h达到高峰[3,4]。大量的研究已证实血清hs-crp水平升高与ami的发生密切相关[5]：它可调节巨噬细胞摄入ldl，有助于泡沫细胞的形成;刺激巨噬细胞产生血栓前组织因子;激活粥样斑块内的补体系统导致斑块不稳定;诱导黏附分子表达，如血管细胞黏附分子-1(vcam-1)、细胞间粘附分子-1(icam-1);致敏内皮细胞，产生ct细胞介导的细胞毒作用造成损坏。

　　il-6主要是由活化的单核-巨噬细胞分泌的一种促炎症细胞因子，为预测急性心肌梗塞的早期基础病变及严重并发症的指标，其血清浓度越高，其发生严重程度及再发心绞痛的风险越高[6]。il-6可促进血管内皮细胞表达黏附分子和其他炎症递质，增强局部的炎症反应;促进血管内皮细胞释放第凝血因子，启动凝血过程;可刺激基质降解酶的合成，侵蚀斑块内的基质，从而导致不稳定斑块破裂[7]。

　　本实验结果表明，当结扎冠状动脉造成ami模型后，大鼠血清hs-crp,il-6含量大幅升高，而预先服用益心胶囊21 d的大鼠，其血清hs-crp，il-6含量均显著降低，且其降低程度与给药剂量呈相关，表明抗炎作用是益心胶囊预防心肌梗塞的作用机制之一，为ami临床治疗早期使用本药提供了依据。

【 参考 文献 】
　　[1] 徐叔云,陈 修.药理实验方法学，第3版[m].北京:人民卫生出版社,2003:1023.

　　[2] mul vihillnt，foly mation in acute cornary syndromes[j].heart,2002,87(3):201.

　　[3] koenig mation and coronary heart disease: an overview[j].cardiol rev,2001:9133.

　　[4] yu h,rifai -sensitivety c-reactive protein and atherosclerosis;from theory to therpy[j].clin boochem,2000,338:601.

　　[5] li jj,fang ch.c-reactive protein is not only an inflammatory maker but also a direct cause of cardiocascular disease[j].med hypotheses,2004,62:499.

　　[6] tsugiyasuk，taka eukin-6 and cardiovascular diseases[j].jpn heartj,2004,45:18.

　　[7] 成士清,刘成玉.炎症标志物crp、il-6和icam-1与冠心病的关系[j].齐鲁医学杂志，2006,21(2):180.