莲白消癌丸提取工艺研究

【摘要】 目的用正交试验法筛选莲白消癌丸提取工艺。方法以总浸出率、野黄芩苷提取率为评价指标，选择加水量（倍）、提取次数、提取时间（h）为考察因素，利用正交实验l9（34）确定了莲白消癌丸的提取工艺。结果最佳工艺条件为提取3次，分别加水8倍量、6倍量、4倍量，提取时间分别为2，1.5，1 h。结论加水量、提取次数、提取时间对该工艺均有显著影响。

【关键词】 莲白消癌丸； 浸膏； 野黄芩苷； 正交实验

莲白消癌丸系临床经验方，用于肝癌、胃癌等肿瘤的治疗。处方由半枝莲、白花蛇舌草、半夏、黄芪等15味中药组成，具有清热解毒、消肿散瘀等功效。现以水作为提取溶剂并选择水总浸出物得率、野黄芩苷提取率为评价指标［1～3］，对其进行提取工艺研究。根据预试结果，采用l9（34）正交实验优选提取工艺条件，为莲白消癌丸工艺研究提供参考。

　　1 仪器与材料

　　1.1 仪器 岛津高效液相色谱系统，包括lc-10atvp泵，spd-10avp紫外光检测器，science柱温箱，ckchrom-ehromatography数据采集系统； bp211d型分析天平（德国赛多利斯）。

　　1.2 材料本处方中药材均购自郑州市药材公司，经河南中医学院陈随清教授鉴定均为正品。野黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：880-200701，含量96.14%）；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。半枝莲药材中野黄芩苷的含量为0.57％。

　　2 方法与结果

　　2.1 提取方法设计该制剂采用水煎提，正交实验方法对加水量（因素a）、煎煮次数（因素b）、煎煮时间（因素c）3个因素进行考察，根据预试结果采用l9（34）正交表安排实验，因素水平设计见表1。将处方中提取药材按照l9（34）正交表规定的因素水平煎煮提取，滤过合并提取液，减压浓缩至相对密度1.3（60℃），60℃减压干燥，得提取物。表1 因素水平表（略）

　　2.2 考察指标测定

　　2.2.1 水总浸出物的测定方法分别精密量取水提药液20 ml，按浸出物测定法(《中国药典》2005年版ⅰ部附录xa)操作，以20 ml提取液相当于原药材量作为分母，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的浸出率。

　　2.2.2 野黄芩苷含量测定方法色谱条件：色谱柱为依利特 c18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水-醋酸（33∶63∶4）［4］；检测波长335 nm；流速1.0 ml/min；柱温为室温。

　　供试品溶液的制备：取工艺考察项下方法制备的样品干浸膏约6 g，精密称定，加石油醚（60～90℃）100 ml回流2 h，弃去醚液，残渣挥干,加甲醇100 ml，80 ml回流提取两次，1 h/次，过滤，合并滤液浓缩，甲醇定容于100 ml量瓶中，即得［5］。

　　对照品溶液的制备：精密称取野黄芩苷对照品8 mg ,置100 ml量瓶中，加甲醇制成每毫升中含80 μg的溶液，摇匀，即得。

　　系统适应性试验：分别精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液、供试品溶液各10 μl，进样。结果表明，野黄芩苷色谱峰理论塔板数大于1 500，阴性样品在野黄芩苷色谱峰位置无干扰。结果见图1。

　　2.2.3 工作曲线的制备从野黄芩苷对照品中分别精密量取2，4，6，8，10 μl，注入液相色谱仪中测定。以野黄芩苷进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，计算得回归方程为y=1 006 970.06x-14 550.57，r=0.998 6，其中：y-代表峰面积，x-代表进样量。表明野黄芩苷进样量在0.16～0.8 μg与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.2.4 样品测定取按各提取工艺制备的样品约6.0 g，精密称定，按照供试品溶液的制备方法制备供试液并测定。结果见表2。

　　由上表：采用综合加权评分的方法，分别将水总浸出物得率、野黄芩苷提取率两项指标加权评分。处方中半枝莲为君药，其主成分野黄芩苷的权重系数设为0.6，水总浸出物得率项的权重系数为0.4。故综合加权评分公式为y=0.4x(y1+69.8)+0.6x(y2+52.4)。对正交实验的结果进行数据处理和方差分析。结果见表2～3。方差分析显示，a因素的影响具有高度显著性意义、c因素的影响具有显著性意义。由极差直观分析可知a>c>b，因此确定，莲白消癌丸水提取的最佳工艺为a3b1c1。即提取3次，分别加水8倍量、6倍量、4倍量，提取时间分别为2，1.5，1 h。表2 实验结果及分析（略）表3 综合加权方差分析（略）

　　2.3 验证实验结果见表4。从实验结果可以看出，所筛选出来的工艺合理可行，稳定可靠，具有可操作性和重复性。表4 验证实验结果（略）

　　3 讨论

　　在预试中野黄芩苷用甲醇作溶剂，溶解性较好，醋酸乙酯、正丁醇做提取溶剂效果均不如甲醇，故采用甲醇作溶剂。高效液相色谱法测定野黄芩苷含量时，用乙腈-水加入少量的醋酸为流动相以不同的比例考察，分离效果不如以甲醇-水加入少量醋酸为流动相。

　　根据浸出原理可知, 在首次提取时，溶剂对药材进行浸润与渗透、溶解与解吸和成分扩散,后续的提取主要是保持浓度差。因此,在本研究中加水量和煎煮时间水平设计为依次递减。优化出的提取工艺参数可以节省了大量的工时,降低了水和能耗。

　　通过正交实验，最终确定莲白消癌丸提取工艺条件为提取3次，分别加水8倍量，6倍量，4倍量，提取时间分别为2，1.5，1 h，其结果经验证实验确认该条件可行。

【参考文献】
　［1］许风鸣，王兆全，李有文.半枝莲化学成分的研究ii［j］.中国现代应用药学，1997，14（6）：8.

　　［2］郑虎占，董泽宏，佘 靖.中药现代研究与应用，第1版［m］.北京：学苑出版社，1997：1685.

　　［3］李守拙，潘海峰，康少文.半枝莲药材中黄酮含量测定［j］.承德医学院学报，2001，18（1）：33.

　　［4］国家药典委员会.中国药典［s］.北京：化学工业出版社，2005：77.

　　［5］乔春峰，韩全斌，宋景政，等 rp-hplc测定半枝莲药材中4种主要黄酮类成分的含量［j］.中国药学杂志，2006,41(17):1342.