依诺肝素钠细菌内毒素检查可行性

【摘要】 　　目的 建立依诺肝素钠的细菌内毒素检查方法。方法根据中国药典2005年版二部附录细菌内毒素检查法进行。结果 依诺肝素钠在浓度为25.0iuaxa/ml时对细菌内毒素检查法无干扰。结论 依诺肝素钠按限值l=0.01eu/iuaxa进行细菌内毒素检查是可行的。

【关键词】 依诺肝素钠；细菌内毒素检查；干扰试验

　　feasibility of detection of bacterial endotoxin in enoxaparin sodium.

　　zheng xia, zhao yu-mei.

　　hainan provincial institute for drug control and inspection, haikou 570102, hainan, p.r. china

　　abstract：objective to establish a method for test of bacterial endotoxin with enoxaparin sodium. methods the experiment was carried out according to china pharmacopeia in 2005 edition (second part)． results enoxaparin sodium at diluted concentration of 25.0iuaxa/ml did not interfere with the results of test of bacterial endotoxin. conclusion enoxaparin sodium with l=0.01eu/iuaxa can be used in bacterial endotoxin test.

　　key words:enoxaparin sodium；bacterial endotoxins test；interference test

依诺肝素钠为抗凝血药，可阻止并抑制血液的凝结，用于防止血栓形成。为了考察该品种是否可以用细菌内毒素检查来代替热原检查， 笔者参照中国药典2005年版二部附录细菌内毒素检查法以及由中检所组织全国有关药检所共同制订指导原则，对依诺肝素钠的细菌内毒素检查法进行了可行性验证。

　　1 试验材料

　　1.1 供试品

　　依诺肝素钠，海南长安国际制药有限公司，规格：原料， 批号：051201，051202，051203。

　　1.2 鲎试剂(tal)

　　湛江安度斯生物有限公司，规格0.1ml,批号：0510262,灵敏度：0.25 eu/ml。湛江博康海洋生物有限公司，规格：0.1ml, 批号：0512010,灵敏度：0.125eu/ml。厦门市鲎试剂实验厂有限公司，规格：0.1ml,批号：051247,灵敏度：0.125eu/ml。

　　1.3 细菌内毒素工作标准品

　　中国药品生物制品检定所，批号：2005－10,效价：100eu/支。

　　1.4 细菌内毒素检查用水

　　湛江安度斯生物有限公司，规格：5ml,批号：0512080。

　　1.5 仪器

　　自动旋涡混合器(上海医大仪器厂)；电热恒温水浴箱(余姚市东方电工仪器厂)；mettler al204电子分析天平。

　　2 方法与结果

　　2.1 限值的确定［1］

　　根据公式：l=k/m，其中m为人用每公斤体重每小时最大剂量,依据药品使用说明书， m=200iuaxa/kg.h；k为人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，静脉给药时k=5eu/kg.h，则限值l＝0.025eu/iuaxa，又《欧洲药典》4.0版规定该药品的l＝0.01eu/iuaxa，最终确定限值为0.01eu/iuaxa。

　　2.2 鲎试剂灵敏度复核实验

　　按照中国药典二部附录细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核，结果见表1所示。3批鲎试剂经用细菌内毒素工作标准品检查，λc在0.5λ～2.0λ范围之内，结果均符合规定。表1 鲎试剂灵敏度复核（略）

　　2.3干扰实验预实验［2］

　　2.3.1 依诺肝素钠有效稀释浓度（mvc）的计算

　　根据公式mvc=λ/l， 其中l为依诺肝素钠的细菌内毒素限值0.01eu/iuaxa， λ为鲎试剂标示灵敏度，目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.5～0.03eu/ml，则依诺肝素钠的对应有效稀释浓度为：50.0、25.0、12.5 、6.25、3.12iuaxa/ml。

　　2.3.2 预实验

　　称取依诺肝素钠用细菌内毒素检查用水分别稀释浓度为100、50.0、25.0、12.5 、6.25、3.12iuaxa/ ml的溶液，将此系列稀释液记为npc。 同时在上述实验液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的实验液中均含有2λ浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为ppc。取灵敏度为0.25eu/ml和0.125eu/ml的3个不同厂家的鲎试剂，分别与上述ppc和npc进行反应，每一浓度重复两管，并设阳性和阴性对照。结果见表2。表2 依诺肝素钠的干扰预实验结果（略）

　　预实验结果表明：3个厂家鲎试剂对依诺肝素钠的细菌内毒素的试验结果在25.0iuaxa/ml以下浓度时无干扰。

　　2.4 正式干扰试验

　　为了最终确认是否存在干扰因素的影响，进行以下正式试验。称取依诺肝素钠用细菌内毒素检查用水分别进行稀释，使其最终干扰试验浓度为25.0iuaxa/ml，按《中国药典》二部附录中的“细菌内毒素检查供试品干扰试验项”进行实验，结果见表3。表3 依诺肝素钠的干扰试验结果（略）注：lot no.0510262,λ=0.25eu/ml; lot no.0512010,λ=0.125eu/ml;lot no.051033,λ=0.125eu/ml。

　　正式干扰试验结果表明：三个鲎试剂厂家的鲎试剂结果et/ es均在0.5～2.0范围之内，确认该样品在25.0iuaxa/ml浓度下无干扰影响。

　　2.5 样品细菌内毒素检查

　　称取样品3批，用细菌内毒素检查用水分别稀释至25.0iuaxa/ml、12.5iuaxa/ml，按中国药典细菌内毒素检查法，使用两批不同厂家的鲎试剂分别对样品进行细菌内毒素检查，并同时设立样品的自身阳性对照管，结果见表4。表4 样品细菌内毒素检查结果（略）

　　3 讨论

　　由干扰预试验结果初步发现依诺肝素钠在25.0iuaxa/ml时与鲎试剂反应无干扰作用，但是三个厂家生产的鲎试剂反应结果有一定的差别，湛江博康海洋生物有限公司和厦门市鲎试剂实验厂有限公司生产的鲎试剂在药品浓度为50.0iuaxa/ml时无干扰作用。正式干扰试验用25.0iuaxa/ml浓度且用三个厂家的鲎试剂进行试验，结果et/ es均在0.5～2.0范围之内，确定在25.0iuaxa/ml浓度时无干扰影响。

　　实验结果表明：将限值定为0.01eu/iuaxa，依诺肝素钠可适用细菌内毒素检查法，鲎试剂灵敏度应该使用0.25eu/ml以上。

【参考文献】
　　［1］2005年版中国药典部分品种建立细菌内毒素检查法研究会议纪要［r］.（中检所药〔2005〕1829号），附件3（细菌内毒素检查法应用指导原则）。

　　［2］chp(中国药典)．2oo5．vol ⅱ (二部)：appendix(附录) xie［s］.