反向Calmagite-EDTA比色法测定血清镁

　　血清镁测定常用甲基麝香草酚蓝、Calmagite及邻甲酚酞络合酮等方法，但均受脂血、胆红素等因素的干扰，致使该类标本结果偏高，本文运用Calmagite-EDTA分光光度法(反向法)克服了上述缺点。

　　1　原理

　　在碱性条件下，Calmagite与镁生成红色复合物，加入EDTA后镁与其生成EDTA-Mg络合物，使Calmagite游离，吸光度值降低，其降低值与镁离子浓度成正比，而克服了本底因素的影响。

　　2　材料与方法

　　2.1　试剂　上海Trace试剂盒(Trace公司Calmagite镁测定试剂盒)，包括：

　　2.1.1　Calmagite试剂：含Calmagite 0.14 mmol/L，KCl 77 mmol/L，PVP 0.03 mmol/L。

　　2.1.2　碱性缓冲液：KCN 1.5 mmol/L，KOH 14.3 mmol/L。

　　2.1.3　应用液：临用前Calmagite液与碱性缓冲液等量混合即可。

　　2.1.4　20 mmol/L EDTANa2溶液。

　　2.2　仪器　751G分光光度计。

　　2.3　方法　测定管(U)、标准管(S)及空白管(B)中依次加血清、1.5 mmol/L镁标准液及蒸馏水各30 μl，加应用液3.0 ml，混匀，540 nm波长比色，B管调零，记录各管吸光度值(A)。各管加20 mmol/L EDTANa2溶液10 μl，混匀，B管调零，按上比色，记录吸光度值(A2)。计算：Mg mmol/L=(UA1-UA2)/(SA1-SA2)×1.5

　　2.4　原法按试剂说明书进行。

　　3　结果与讨论

　　3.1　EDTANa2浓度选择　空白管中加入5 mmol/L　EDTANa2溶液5 μl后吸光度值轻微降低，可能系试剂中含有微量镁的缘故。1.5 mmol/L镁标准液加入10 mmol/L EDTANa210 μl后吸光度值不再降低，至100 mmol/L时仍无变化，故本文选用20 mmol/L EDTANa2溶液已能满足需要。

　　3.2　稳定性　镁与Calmagite的络合反应瞬间完成，吸光度值至少60 min内无变化。加入EDTANa2后其络合物立即分解，吸光度值迅速降低至本底值，60 min内无变化，其结果满意。

　　3.3　精密度　取2份不同浓度的血清，平行测定镁浓度10次，批内CV值分别为1=0.87 mmol/L，s1=0.028，CV1=3.22%及2=0.92 mmol/L，s2=0.039，CV2=4.24%。批间1=0.872 mmol/L，s1=0.043，CV1=4.93%及2=0.918 mmol/L，CV2=5.33%。

　　3.4　回收率　于镁浓度为0.92 mmol/L的混合血清中分别加入浓度分别为0.2，0.6及0.8 mmol/L的镁标准，测得回收值依次为0.195，0.602及0.825 mmol/L，回收率分别为97.5%，100.3%及103.1%。

　　3.5　方法学比较　用反向法及原法同时测定10份外观正常血清，其结果分别为反向法=0.884 mmol/L及原法=0.897 mmol/L，P>0.05。10份TG浓度在3.4～23 mmol/L的血清标本：(±s)反向法=0.817±0.21 mmol/L，原法=1.32±0.47，P<0.05。脂血中镁浓度原法明显高于本法。10份脂血标本用乙醚去脂后再测，其结果为(±s)原法=0.823±0.29 mmol/L，与反向法比较P>0.05。脂血所致的结果增高，是由于样本本底干扰所致。

　　综上所述，用反向法测定血清镁浓度方法简便、快速、可有效地排除本底对吸光度的干扰，适用于脂血、母乳、奶制品、尿液等样本镁离子浓度测定，日常工作中对不适应直接比色法的标本最好用该法求得准确结果。

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