Suvivin和VEGF在前列腺癌组织中的表达及相关性研究

　[摘要] 目的 通过检测前列腺增生（BPH）和前列腺癌（PCa）组织中Survivin和VEGF的表达情况，分析Survivin和VEGF表达与前列腺癌组织Gleason评分、肿瘤转移的关系及二者之间的相互关系。 方法 应用免疫组化SP法检测20例BPH和40例PCa组织中Survivin及 VEGF的表达情况以及二者在PCa不同病理分级、远处骨转移中的表达情况。 结果 PCa组织中Survivin及VEGF的表达情况分别为87.5%和90.0%，二者与BPH组织相比，差异有统计学意义（P < 0.05）。Survivin在中低评分组（中、高分化）PCa及高评分组（低分化）PCa中的表达阳性率分别为65.0%和95.0%，差异有统计学意义（P < 0.05）；VEGF的表达率分别为70.0%和100.0%，差异有统计学意义（P < 0.05）。Survivin在伴全身骨转移、非骨转移两组中的表达阳性率分别为87.6%和44.0%，差异有统计学意义（P < 0.05）。VEGF的阳性表达率分别为72.0%和93.3%，差异有统计学意义（P < 0.05）。Survivin与VEGF在PCa中的表达呈正性相关（r = 0.378，P = 0.017 < 0.05）。 结论 Survivin及VEGF的表达与PCa病理分级、骨转移密切相关，检测Survivin及VEGF的表达可以判断PCa的进展及预后情况，且Survivin和VEGF在PCa的发生、发展中存在协同作用。
　　[关键词] 前列腺癌；Survivin；VEGF；免疫组化
　　[中图分类号] R737.25 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）10（a）-0021-03
　　前列腺癌（PCa）是一种在老年人中多发的恶性肿瘤，Survivin可以作为抗肿瘤治疗的新靶点[1]，是一个有潜在价值的肿瘤标志。血管内皮生长因子（VEGF）与肿瘤血管生成有关，是目前发现的促进肿瘤血管形成的最重要的促进因子[2-4]。针对它的治疗可能是治疗癌症的一个有效的方法。本实验采用免疫组化SP法检测Survivin和VEGF在PCa及前列腺增生（BPH）中的表达，结合临床资料分析Survivin和VEGF表达与肿瘤Gleason评分、转移的关系及二者之间的相互关系，从而探索前列腺癌诊断和治疗的新方法。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　实验组（PCa组）选自内蒙古医学院第三附属医院泌尿外科2003～2011年前列腺切除术的PCa患者40例，年龄68～80岁，平均73.5岁，组织石蜡包埋标本经病理检查证实为PCa，术前均未接受任何治疗，且排除其他肿瘤、血液疾病等干扰因素。PCa组Gleason评分<7者为中低评分组（20例），Gleason评分≥7者为高评分组（20例）；无骨转移者25例，有骨转移者15例。对照组（BPH组）同样选自2003～2011年前列腺切除术的BPH患者20例，年龄58～70岁，平均64岁，经病理检查证实为BPH，排除其他疾病。
　　1.2 试剂
　　即用型兔抗人SURVIVIN多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，即用型鼠抗人VEGF单克隆抗体购自福州迈新生物制品有限公司。
　　1.3 方法
　　标本为10%福尔马林固定，石蜡切片，HE染色和免疫组化染色。免疫组化采用SP法，按说明书操作。用PBS代表一抗作空白对照。
　　1.4 结果判断
　　组织切片中以胞质染为淡黄色至棕黄色者为阳性。染色强度：0分为无色，1分为淡黄色，2分为黄色，3分为棕黄色。阳性细胞百分比即高倍视野随机观察某类细胞3～5个视野，计算100个阳性细胞数平均值：阴性为0分，阳性细胞≤10%为1分，11%～50%为2分。定性标准：着色程度评分×着色细胞百分率评分≤1分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+），4～6分为阳性（++），>6分为强阳性（+++）。
　　1.5 统计学方法
　　采用SPSS 13.0软件进行统计学处理。Survivin及VEGF的表达采用χ2检验或Fisher确切概率法。Survivin及VEGF蛋白表达相关性采用配对资料的关联性分析。P < 0.05表示差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 Surviving、VEGF在BPH及PCa中的表达情况
　　二者具体的表达情况见图1～2、表1～2。Survivin在BPH中不表达，在PCa中有不同程度的表达，染色位于胞质内，呈淡黄色至棕黄色颗粒状（图1）。VEGF在BPH及PCa中有不同程度的表达，弥散分布于前列腺上皮细胞的胞质、基质细胞和间质；在微血管上皮细胞及其周围基质细胞中呈强阳性表达（呈黄色至棕黄色颗粒状）（图2）。
　　2.2 Survivin、VEGF在PCa不同病理分级及骨转移中的表达情况
　　具体结果见表2。
　　2.3 Survivin与VEGF在PCa中表达的相关性分析
　　40例PCa标本中，Survivin和VEGF的表达情况见表3，行Spearman等级相关分析，Survivin与VEGF在PCa中的表达呈正相关（r = 0.378，P = 0.017 < 0.05）。
　　3 讨论
　　细胞凋亡，是细胞的程序化死亡。正常机体能够维持细胞凋亡和增殖平衡，凋亡下调或增殖过度都将增加细胞的生存寿命，从而促进肿瘤的发生。Survivin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis，IAP）是目前发现最强的凋亡抑制因子，其诱导细胞凋亡的主要机制是：①抑制Bax和Fas诱导的细胞凋亡；②与caspase-3和caspase-7的相互作用；③调节有丝分裂和胞质分裂，参与血管生成。病理情况下，Survivin几乎表达于所有肿瘤类型，而在正常的非恶性肿瘤细胞中则不表达。国外研究显示Survivin蛋白在肺癌和乳腺癌细胞株中表达最高，而在肾癌中表达则最少[5]。李守宾等[6]采用免疫组织化学方法检测，Survivin在BPH及PCa组织中表达率分别为12.0%和82.2%，且表达强度与Gleason评分呈强正相关。这些与骆晓梅等[7]的研究结果一致。本研究显示，BPH和PCa组织中Survivin蛋白的表达率分别为0和87.5%，证实了Survivin在大多数恶性肿瘤中均有表达，而在成人的终末分化组织中则没有。Survivin在中低评分组（中、高分化）及高评分组（低分化）中的表达阳性率分别为65.0%和95.0%，差异有统计学意义（P < 0.05），Survivin在伴全身骨转移、非骨转移两组中的表达率分别为87.6%和44.0%，提示Survivin的表达与PCa病理分级、骨转移密切相关，证实Survivin参与了肿瘤的发生、发展。

正常机体内促血管内皮细胞生长因子和抗血管内皮细胞生长因子保持相对平衡，从而使人体内的血管发生、分化。在有肿瘤生长的情况下，多种致癌因素使促血管内皮细胞生长因子的数量远远超过抗血管内皮细胞生长因子，为肿瘤提供了优越的生长环境。在参与血管生成的众多因子中，VEGF被证实是最强大和最重要的因子。人的VEGF蛋白是于1989年由Gospodarowicz发现，其分子量为35～44 kDa。研究表明，肿瘤组织中VEGF有过度表达情况，组织中也有大量血管新生。目前认为PCa细胞可以诱导血管发生从而促进肿瘤的发展[8]。有研究发现VEGF的表达与PCa淋巴结转移及Gleason评分密切相关[9]，VEGF在PCa的形成及转移中起着重要的作用[10]。Lekas等[11]研究发现，PCaVEGF表达明显高于BPH，而且VEGF与PCa的病理分级关系密切，伴有远处转移的PCa中VEGF表达明显高于不伴转移者，差异有统计学意义（P < 0.05）。本实验中，BPH和PCa组织中VEGF蛋白的表达率分别为35.0%和90.0%，差异有统计学意义（P < 0.05）。VEGF在PCa高、中分化即中低评分组与低分化即高评分组中的表达率分别为70%和100%，差异有统计学意义（P < 0.05）。VEGF在有骨转移组及无骨转移组中的表达率分别为72.0%和93.3%，差异有统计学意义（P < 0.05）。说明VEGF的表达与PCa病理分级及是否骨转移有关系。据此判断，VEGF的过度表达与PCa的发展及预后关系密切，是预后不良的重要指标。检测VEGF的表达可以判断PCa的进展及预后情况。
　　Survivin和VEGF已被证实在多种肿瘤的发生、发展中起到了协同作用[12]。Mesri等[13]研究发现Suvivin和VEGF一起参与调节肿瘤血管形成。VEGF在肿瘤血管生成过程中发挥的内皮细胞抗凋亡作用依赖于其诱导的Survivin表达上调[14]。本实验中40例PCa组织标本中，等级相关分析结果显示，Survivin与VEGF在PCa中的表达呈正性相关（r = 0.378，P < 0.05）。与国内外报道结果一致。研究进一步证实Survivin和VEGF在PCa的发生、发展中起着重要的协同作用。联合检测Survivin和VEGF的表达必将为评价PCa的发展和预后提供重要的理论依据。
　　总之，Survivin及VEGF的研究已经取得了一些进展，但还有很多地方是值得进一步作深入研究。如Survivin的表达受何种调节，各种异构体之间的关系及作用，以及Survivin在肿瘤靶向治疗中的作用等。抗血管生成治疗的各种机制只是假设[15]，包括可能会影响抗血管生成抑制剂疗效的肿瘤相关血管内皮细胞中的染色体异常[16-17]。这种抑制可以发生在任何促进血管生长或发展的环节中[18-19]。这包括参与下调血管内皮细胞的运动或扩散，阻止生长因子受体信号或内皮细胞特异性信号通路，及抑制血管生成的其他积极的因素。
　　[参考文献]
　　[1] Lecellier G，Brenner C. Genomic and proteomic screening of apoptosis mitochondrial regulators for drug target discovery [J]. Curr Med Chem，2007，14（8）：875-881.
　　[2] Shibuya M. Role of VEGF-flt receptor system in normal and tumor angiogenesis [J]. Adv Cancer Res，1995，67：281-316.
　　. Cancer，l996，77：858-863.
　　. Cancer Res，1997，57（24）：5590-5597.
　　. Oncogene，2005，24（12）：1994-2007.
　　[6] 李守宾，李双利，李连印，等.前列腺癌中 Survivin蛋白的表达[J].现代泌尿外科杂志，2009，14（2）：123-124.
　　[7] 骆晓梅，刘家云，苏明权，等.肿瘤特异性survivin启动子在前列腺癌细胞中的活性鉴定[J].中华男科学杂志，2007，13（6）：502-506.
　　. Cancer Res，2007，67（7）：3310-3319.